上海黄海药检仪器有限公司
四黄栓是由云南中医药大学第一附属医院院内制剂四黄软膏改制而成，其处方是肛肠科钟传珍老医生通过长期临床经验而得，由大黄、黄芩、黄连、黄柏、冰片五味中药组成。全方组成结构严谨，大黄、黄连、黄柏、黄芩四味合用清热解毒、散肿、化瘀止痛，冰片辛香走窜，能散热结、消肿痛、燥湿热，具有去恶生新的特点，主要适用于湿热下注所致的痔疮、肛裂、肛漏、肛周肿痛或瘙痒、大便带血，肛管炎见上述症候者。方中重用黄柏、黄连，黄柏中含有盐酸小檗碱、黄柏碱等生物碱，其中以盐酸小檗碱含量最高; 黄连中含有盐酸小檗碱、黄连碱、甲基黄连碱等生物碱类，其中盐酸小檗碱含量最高。为了能保证栓剂成品的质量，药材提取物浸膏粉中盐酸小檗碱的含量检测尤为重要，本实验参照文献和法定标准，采用高效液相色谱法( HPLC) 测定药材浸膏中盐酸小檗碱的含量，并设计正交试验对栓剂成型工艺进行优化。
仪器与试药
PTX-FA210S 分析天平［华志( 福建) 电子科技有限公司］，Ｒ-300HL 旋转蒸发仪［瑞士步琦有限公司( BUCHI Labortechnik AG) ］，DLSB-/510 低温冷却液循环泵 ( 巩义 市 予 华 仪 器 有 限 责 任 公 司) ，DHG9140A 电热鼓风干燥箱( 广东泰宏君科学仪器股份有限公司) ，SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵( 郑州长城科工贸有限公司) ，RBY-N 型融变时限试验仪( 上海黄海药检仪器有限公司) ，Agilent 1260 高效液相色谱仪，配置 G1312C 型二元泵、VWD 紫外检测器( 美国Agilent 公司) ; Phenomenex C18色谱柱( 4. 6 mm × 250mm，5 μm) ; 大黄药材( 批号: 191200161，成都康美药业生产有限公司) ，黄连药材( 批号: 180506，山东百味堂中药饮片有限公司) ，黄柏药材( 批号: 190814，安徽致良中药饮片有限公司) ，黄芩药材 ( 批号:1911006，云南和合中药饮片有限公司) ，盐酸小檗碱对照品( 批号: DST200509-028，纯度≥98%，成都德斯特生物技术有限公司) ，甲醇、乙腈为色谱纯，其余试剂为分析纯。
方法与结果
盐酸小檗碱含量测定方法的建立
色谱条件
采用 Phenomenex C18色谱柱( 4. 6 mm×250 mm，5 μm) ; 以乙腈-0. 05 mol·L－1磷酸二氢钠溶液( 50 ∶50) 为流动相( 每 100 mL 中加十二烷基硫酸钠 0. 4 g，再以磷酸调节 pH 值为 4. 0) ; 检测波长为 345 nm( VWD 紫外检测器) ; 进样量为 10 μL; 流速为 0. 8 mL·min－1; 柱温为室温，即 25 ℃。
对照品储备液的制备
精密称取适量的盐酸小檗碱对照品，加甲醇-盐酸( 100 ∶1) 的混合溶液，超声( 功率 120 W，频率 65kHz) 20 min 至完全溶解，配制至浓度为 0. 19 mg·mL－1，即得。
供试品溶液的制备按处方量称取药材，加入 8 倍的 75%乙醇，75 ℃回流提取 3 次，每次时间为 1 h。合并 3 次所得滤液，置旋转蒸发仪上回收乙醇蒸至流浸膏状，转移至蒸发皿中，置恒温烤箱中于 105℃ 烤干，得到浸膏粉。取浸膏粉，研成细粉，混匀，精密称取 0. 1 g，加入甲醇盐酸( 100 ∶1) 的混合溶液 100 mL，密塞，称定重量，震摇均匀，水浴加热溶解 15 min( 水浴温度为60 ℃ ) ，再放入 超 声 仪 中 超 声 30 min ( 功 率 120 W，频 率65 kHz) ，取出放置至室温，擦干锥形瓶外壁的水，再称定重量，加甲醇-盐酸( 100 ∶1) 的混合溶液补足溶解过程中减失溶剂的重量，摇匀，滤过，精密吸取滤液，加甲醇-盐酸( 100 ∶1) 的混合溶液稀释 5 倍，摇匀，用孔径为 0. 45 μm 微孔滤膜滤过，即得。
